1537 г. — Capo primario и герцог Флоренции

Климент VII не дожил до того момента, когда после некоторой смуты в 1537 году представитель младшей ветви рода Козимо I, прозванный Великим (1519–1574), правнук по женской линии Лоренцо Великолепного, получил от императора Карла V титул герцога Флоренции и при помощи императорских войск сломил аристократическую оппозицию, в которой среди прочих состояли семьи Альбуцци и Строцци. В том же году республиканские власти Флоренции присвоили ему высшую должность — capo primario. Умирая в 1547 году, Козимо I вполне мог гордиться тем, что за 37 лет правления обеспечил Флоренции почти абсолютную суверенность, доведя численность местного императорского гарнизона до символических двух сотен солдат. Кроме того, он значительно увеличил подвластные ему территории за счет Сиены, построил и украсил новые резиденции, достойные самых могущественных европейских монархов. Позаботился он и о достойных с ними отношениях, женившись на Элеоноре Толедской, дочери вице-короля Неаполя, но прежде всего устроив брак своего сына Франческо I с эрцгерцогиней Иоанной Габсбург — сестрой Максимилиана II Габсбурга, наследника Карла V на императорский трон. Главным доказательством преобладания Флоренции среди городов центральных территорий Апеннинского полуострова было получение Козимо I в 1569 году титула великого герцога Тосканы.